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近年來(lái)單克隆抗體已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)理論與臨床應(yīng)用研究［1］。如何制備質(zhì)量好產(chǎn)量高的單克隆抗體是當(dāng)前各有關(guān)實(shí)驗(yàn)室研究的重要問(wèn)題，通常用于生產(chǎn)單克隆抗體的方法有兩種：①利用純系小鼠生產(chǎn)免疫腹水，該法的優(yōu)點(diǎn)是產(chǎn)量和效價(jià)高，但純化困難，價(jià)格昂貴，生產(chǎn)周期長(zhǎng)；②雜交瘤細(xì)胞常規(guī)體外培養(yǎng)法，此法雖然產(chǎn)量不價(jià)低，但不含正常小鼠免疫球蛋白，較易純化且成本低，但此法若需大量生產(chǎn)則需特殊設(shè)備［2］。近有人報(bào)道用雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)也可提高單克隆抗體的產(chǎn)量且方法簡(jiǎn)便［3］。經(jīng)我們對(duì)3株抗人衰變加速因子（Decay-Accele
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（一）融合劑細(xì)胞融合的方法有物理法，如電融合、激光融合，化學(xué)融合法和生物融合法，如仙臺(tái)病毒，此處例舉化學(xué)融合法中的一種即聚乙二醇融合法。聚乙二醇（PEG），在分子量為200～700時(shí)，呈無(wú)色、無(wú)臭的粘稠狀液體，分子量大于1000時(shí)，呈乳白色蠟狀固體，能溶于水、乙醇及其他許多有機(jī)溶劑，對(duì)熱穩(wěn)定，與許多化學(xué)藥品不起作用。用作細(xì)胞融合劑的聚乙二醇一般選用分子量為4000者，常用濃度為50％，pH8.0～pH8.2（用10％NaHCO3調(diào)整），分子量小的PEG，融合效應(yīng)差，又有毒性，分子量過(guò)大，則粘性太
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1.1細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染原理：通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因?qū)爰?xì)胞，一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)左右，靶基因即可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用：觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（短時(shí)間即可進(jìn)行觀察，但效應(yīng)會(huì)很快丟失）一般流程：1）細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80%覆蓋2）細(xì)胞轉(zhuǎn)染（脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE6等）3）48小時(shí)以后鑒定目
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在細(xì)胞生物學(xué)中，一個(gè)常見(jiàn)的問(wèn)題是如何獲取與細(xì)胞功能相關(guān)的各種定量測(cè)量信息。在免疫細(xì)胞化學(xué)中也存在同樣的問(wèn)題。制作免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本環(huán)節(jié)較多，只要有一個(gè)環(huán)節(jié)失誤就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術(shù)。那么，做成了理想的標(biāo)本后，如何進(jìn)行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些信息能較客觀的反映出來(lái)，這就是本章的編寫(xiě)目的。一、定量分析的重要性目前有許多研究免疫細(xì)胞化學(xué)的文章，是做定性和定位研究的。如有文獻(xiàn)中提到，P物質(zhì)在腦組織中存在于30處以上，這只是解決了定性定位問(wèn)題，這些部
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疫沉淀是利用特異性抗體識(shí)別并分離抗原的方法。材料：上樣buffer的配方(用前現(xiàn)配):2ul1.25MTris-HCL,pH6.835uldistilledwater2.5ul2-mercaptoethanol12.5ul10%SDS10ul80%glycerol2ulbromphenolblueTNEbuffer:10mMTris-HClpH8.010mMNaCl0.5mMEDTA方法：1．用含有1%NP40的緩沖液重懸細(xì)胞，充分振蕩。2．在冰上孵育30分鐘或37℃孵育10—15分鐘3．轉(zhuǎn)入e
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（一）雙縮脲測(cè)定法1．原理蛋白質(zhì)中的肽鍵有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中與二價(jià)銅離子形成藍(lán)紫色的絡(luò)合物，在一定的范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。此法特異性強(qiáng)，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產(chǎn)生這種反應(yīng)，但此法不夠敏感，僅能測(cè)出毫克水平。2．試劑配制硫酸銅（CuSO4·5H2O）1.50g酒石酸鉀鈉5.00gH2O500.0ml10％*（不含*）300mlH2O加至1000ml此溶液可長(zhǎng)期保存，如產(chǎn)生暗紅色沉淀，則應(yīng)廢棄重配。3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備⑴準(zhǔn)確稱取牛血清白蛋白1.0g（必要時(shí)須首先采用凱氏定
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厭氧菌在有氧的情況下不能生長(zhǎng)。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個(gè)無(wú)氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢(shì)。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實(shí)際情況選用。1．厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來(lái)。2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來(lái)培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有
