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免疫組化結果常見問題分析(一)結果陰性的原因1.抗體濃度和質量問題以及抗體來源選擇錯誤;2.抗原修復不全,換修復液或加強修復;3.組織切片本身這種抗原含量低,設陽性對照片;4.血清封閉時間過長;DAB孵育時間過短;6.細胞通透不全,抗體未能充分進入胞內參與反應。(二)非特異性染色的原因(著色一片黃/背景深)1.抗體孵育時間過長,抗體濃度;2.多抗易出現非特異性,可選擇單抗;3.內源性過氧化物酶和生物素滅活不夠;4.非特異性組分與抗體結合,延長血清封閉時間;5.DAB孵育時間過長或濃度過高;6.P
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腺相關病毒屬于微小病毒科(parvovirus),為無包膜的單鏈線狀DNA病毒,基因組大小約4.7kb。利用腺相關病毒可以將外源基因轉入動物組織和細胞中,具有安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、表達穩定等多種優點,廣泛應用于動物體內研究。腺相關病毒血清型眾多(12種),不同血清型對不同組織親和性不同,因此在具體科學研究中,以下問題往往困擾著廣大科研工作者:選擇何種血清型?如何注射?注射多少病毒?注射部位如何選擇?注射多久檢測?本文就常見的注射部位(大腦、視網膜、肝臟、心臟和動脈、肺臟、腎臟、肌肉、
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PCR反應的大特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產生.污染原因(一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染,或標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染.(二)PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三
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提起膜蛋白,浮現在廣大從事蛋白研究的科研工作者腦海中的是兩點:1.膜蛋白功能的重要性。2.膜蛋白研究的困難性。*,膜蛋白在細胞間接觸、表面識別、信號轉導、酶活性和運輸方面都扮演著重要的角色。由于它們功能多樣,也就成為理想的藥物靶點。然而,膜蛋白的生化和結構研究一直都很緩慢。ProteinDatabase的統計數據表明,在成功解析出三維結構的蛋白中,膜蛋白只占1%,這與膜蛋白占總蛋白的1/3的總量的差別巨大。由此也可以看出膜蛋白研究確實困難重重。圖1.利用QIAgenes優化序列,昆蟲細胞體外進行
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小鼠尿微量白蛋白(ALB)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿,相關液體樣本尿微量白蛋白(ALB)含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠尿微量蛋白(ALB)水平。用純化的小鼠尿微量蛋白(ALB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入尿微量蛋白(ALB),再與HRP標記的ALB抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終
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一、實驗目的與原理蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移取決于它所帶電荷以及分子大小和形狀等因素。1967年Shapiro等人發現,如果在聚丙烯酰胺系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(SDS),大多數蛋白質能與SDS按一定比例結合,即每克蛋白質結合1.4g的SDS-復合物都帶上相同密度的負電荷,它的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量,因而消除了蛋白質原有的電荷差別,使蛋白質分子電泳的遷移率主要取決于本身的分子量,而與蛋白質所帶的電荷無關,在一定條件下,蛋白質的分子量的對數與電泳遷移率間呈負相
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(一)原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(鹽析得到的IgG)中均含有硫酸銨等鹽類,這類將影響以后的純化,所以純化前均應除去,此過程稱為“脫鹽”(desalthing)。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法,這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小,但所需時間較長,且鹽不易除盡;凝膠過濾法則能將鹽除盡,所需時間也短,但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以,要根據具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小,凝膠達濾后樣品體積不會太增加,所以選用凝膠過濾法。(二)試劑與器材(1)SephadexG-25。(2)0.
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大鼠表皮生長因子(EGF)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中表皮生長因子(EGF)的含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠表皮生長因子(EGF)水平。用純化的大鼠表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子(EGF)再與HRP標記抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終

