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活體成像中熒光色素標記細胞的方法舉例活體光學成像(OpticalinvivoImaging)主要采用生物發光(bioluminescence)技術與熒光(fluorescence)技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,今天,生物發光標記物可以標記到任何一種基因上,使對基因功能的全面細致研究成為現實。而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP,Cyt及dyes等)進行標記,利用熒光蛋白在外源光源或是內源發光照射下被激發產生的熒光作為檢測信號。研究人員能夠利用一套
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一氧化氮(NO)信號通路研究一氧化氮合酶(NOS)抑制劑研究背景:一氧化氮(NO)是自分泌和旁分泌的信號通路分子,可以擴散進入生物膜。發揮作用時間很短(幾秒鐘),主要的生理功能是促進血管動態平衡。它能夠抑制平滑肌收縮生長,阻止血小板凝聚以及防止白細胞-內皮細胞粘附。另外它還參與免疫防御系統,神經傳遞,血管生成等過程。NO的下游靶標包括鳥苷酸環化酶和NF-κB,前者可以提高cGMP水平,后者在iNOS基因表達作為重要的轉錄因子。體內NO水平和信號失調常發生于某些疾病狀態。糖尿病病人具有低于的NO水
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小鼠胚胎成纖維細胞的富集1、給13-14天的孕鼠注射大約0.5ml阿佛丁。當鼠麻醉后,實施斷頸法處死小鼠。2、用70%乙醇擦拭腹部,把皮膚向后拉,暴露出腹膜。用消毒過的工具,剪開腹壁以暴露出子宮角。將子宮角移到10cm的皿里。用10ml不含鈣鎂離子的PBS洗三遍。3、用剪刀剪開每一測的胚囊,并將胚胎移到培養皿中。4、用兩副鐘表鑷子將胎盤和膜與胚胎分離開,分離后切除內臟(所有深色的東西)。將胚胎轉移到(有蓋)培養皿中,用10ml不含鈣鎂離子的PBS洗三遍。5、用帶有彎鉤的眼科剪將組織剪碎,當你剪的
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相關專題Bradford法檢測蛋白濃度專題考馬斯亮藍法也稱考馬斯藍染色法(coomassiebluestaining)又稱Bradford法。由于其突出的優點,正得到越來越廣泛的應用。考馬斯亮藍G-250(CoomassiebrilliantblueG-250)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態下呈紅色,大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變為青色,蛋白質-色素結合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-25
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本實驗目的是掌握小鼠睪丸、附睪及輸精管精子采集方法;掌握血球計數板法精子計數和運動能力檢測的方法;通過睪丸、附睪及輸精管精子運動能力檢測,認識精子在睪丸產生后,在附睪內成熟的過程;掌握精子抹片方法;掌握染色法進行精子結構觀察和頂體結構觀察的方法,認識精子的正常結構。實驗方法原理哺乳動物的精子形成后必須經過在附睪內發生一系列形態、生理和生化方面的變化而終達到成熟后,才能獲得向前運動的能力,這種向前運動是精子受精能力的重要指標。哺乳動物精子包括頭部和尾部二個主要部分,頸部介于頭部和尾部之間,形成頭部
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殺傷功能是機體免疫功能的一個重要方面,免疫系統中有多種具有殺傷功能的靶細胞,如自然殺傷細胞(NK)、細胞毒性T細胞(CTL)、具有ADCC作用的單核細胞巨噬細胞等實驗方法原理NK細胞存在于人或動物外周血、脾臟、淋巴結和骨髓中,能殺傷某些腫瘤細胞、病毒感染靶細胞,無需抗原或有絲分裂原刺激,也不依賴抗體或補體,在機體殺傷腫瘤、防御感染及免疫調節中發揮重要作用。LAK是NK或T細胞在體外高劑量IL-2誘導下,獲得能殺傷NK抵抗的腫瘤細胞的功能,在過繼免疫治療腫瘤中已得到廣泛的應用。通過將同位素51Cr
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(一)原理凋亡細胞是由于內源性核酸內切酶的激活后,將DNA切割成許多雙鏈DNA段以及高分子量DNA單鏈斷裂點(缺口),暴露出大量3-羥基末端,如用末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)將標記的dUTP進行缺口末端標記,則可原位特異地顯示出凋亡細胞。主要應用的是熒光標記法和酶標記法。(二)熒光標記法1.材料與試劑采用德國Boehringer-Mannheim公司InSituCellDeathDetection試劑盒,或美國Oncor公司ApopTagTM試劑盒,包括:⑴生物素標記的-Dutp(Biotin
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TUNEL與ELISA檢測凋亡的方法比較TUNEL法細胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法(terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabeling,TUNEL)。由于正常的或正

