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一、原理與目的多酚氧化酶是植物組織內廣泛存在的一種含銅氧化酶，植物受到機械損傷和病菌侵染后，PPO催化酚與O2氧化形成醌，是組織形成褐變，以便損傷恢復，防止或減少感染，提高抗病能力。醌類物質對微生物有毒害作用，所以傷口醌類物質出現是植物防止傷口感染的愈傷反應，因而受傷組織一般這種酶的活性就會提高。多酚氧化酶也可與細胞內其他底物氧化相偶聯，起到末端氧化酶的作用。PPO的存在是水果、蔬菜褐變及營養喪失的主要原因之一。PPO氧化內源的酚類物質生成鄰醌，鄰醌再相互聚合成醌或蛋白質、氨基酸等作用生成高分子
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一、試劑準備1、新鮮配制冷的RIPA裂解緩沖液:150mMNaCL1%NP-40(去垢劑)0.1%SDS(去垢劑)2ug/mlAprotinin(蛋白酶抑制劑)(使用前加入)2ug/mlLeupeptin(蛋白酶抑制劑)(使用前加入)1mMPMSF(蛋白酶抑制劑)1.5mMEDTA(蛋白酶抑制劑)1mMNaVanadate(磷酸脂酶抑制劑)(任選)以上所有試劑均按比例溶于150mMNaCL溶液中。2、冷的PBS中加入1mMPMSF1.5mMEDTA1mMNaVanadate（釩酸鈉）(任選)3、
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你試一試這兩種方法:種：1）將細胞系放在冰上2）去除上清，用pH7。4的冷磷酸鹽緩沖液洗滌單層細胞兩次3）加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min4)刮下單層細胞，4度下10000g5min離心5）溶液37度水浴10min以分離水相和去污劑相，然后37度下2000g離心5min6)收集水相留作分析7）用500ul冰冷的bufferC溶解去污劑相沉淀，冰浴2min后加溫，在按步驟6再次離心8）按步驟8再次抽提去污劑相，用bufferC將洗滌后的去污劑相稀釋到初始體積9）用等量的bufferA
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目前常用比色法測定樣品蛋白的含量：Bradford法（考馬斯亮藍法）、Lowry法（Folin-酚試劑法）、BCA法等。但各有優缺點，大家可以根據具體情況選取。按相應蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量一致，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據所使用的裂解液的不同，需要采用適當的蛋白濃度測定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大，大家可以根據具體情況選取。Bradford法（考馬斯亮藍法）:考馬斯亮藍G-250
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一、放射免疫分析的基本試劑（一）標準品標準品是放射免疫分析法定量的依據，由于以標準品的量用來表示被涮物質的量，故標準品與被測物質應當化學結構一致并具有相同免疫活性。標準品作為定量的基準。應要求高度純化。標準品除含量應具有準確性外，還應具備穩定性，即在合理的貯存條件下保持原來的特性。按實驗要求，將標準品用緩沖液配成含不同劑量的標準溶液，用于制作標準曲線。（二）標記物標記抗原應具備：①比放射性高，以保證方法的靈敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期盡可能長，標記一次可較長時間使用，這對來之不易的抗
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原代細胞的培養與建系細胞的來源多樣，培養方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經分散接種之手段稱為傳代。凡能經傳代方式進行再次培養的細胞稱為傳代細胞。若能穩定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經大量擴增后所形成的生物學特性穩定的克隆化細胞群，稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術是從事細胞培養工作的基礎，只有熟悉和掌握了基本技術,才可能更快捷地學習和
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無血清培養基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的*培養基可以滿足大部分細胞培養的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細胞在培養過程中分泌某種物質（抗體、生長因子）的能力；或者要大規模的培養某種細胞，以獲得它們的分泌產物。無血清培養基的基本配方:
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CHO細胞表達系統與畢赤酵母表達系統是當前發展前景看好的兩個表達系統，為了能夠更加直觀地對兩個表達系統有一定的認識，特意在此篇中對兩個表達系統作一定的比較，從而能夠更進一步的對兩個表達系統有更深的了解1．CHO細胞表達系統（1）優點CHO細胞屬于成纖維細胞，既可以貼壁生長。也可以懸浮生長。目前常用的CHO細胞包括原始CHO和二氫葉酸還原酶雙倍體基因缺失型(DHFR-)突變株CHO。近年來，為降低生產成本和減少血制品帶來的潛在危害性，動物細胞生產開始使用無血清培養基(SFM)，但SFM往往導致細胞
