單克隆抗體（簡稱單抗）具有選擇性好、靶向性強、臨床效果 好等特點。由于單抗具有的這些小分子藥物難以匹敵的優勢， 單抗受到研發者和醫藥市場的青睞。截止2022年7月，在中國 批準上市的國產單抗36個，進口單抗46個。國際上上市的單抗 超過110種，相比國際單抗種類，中國單抗市場還有較大增長 空間。 在單抗的發酵、純化和存儲過程中，因為酶或者非酶的條件， 導致單抗存在一系列翻譯后修飾，例如糖基化、糖化、氧化、 脫酰胺和K丟失等。大量文獻研究表明，這些翻譯后修飾的不同 對單抗的安全性和有效性存在較大的影響。例如，隨著糖化水 平的增加[1-4]，容易導致抗體表面正電荷減少，從而導致抗體 聚集體的增加。此外，糖化后的抗體也容易進一步反應，例如 羧甲基化，導致抗體顏色的變化[5]。又如，輕鏈N30的脫酰胺 造成赫賽汀輕微的效價丟失[6]，重鏈N55的脫酰胺造成該藥物 效價的顯著降低[7]。雖然沒有報道表明K Loss的比例與抗體的 活性有直接關系，但K loss比例的不同會造成抗體藥物批次一致 性的差異。 在這些翻譯后修飾中，很多會導致抗體電荷的變化，即形成電 荷異構體。傳統的的電荷異構體分離方法包括離子交換和電泳 法。兩種方法分離機理不同，離子交換法根據抗體表面電荷的 不同進行分離，而電泳法如iCIEF根據抗體凈電荷的不同進行 分離。定性酸堿組分，研究其來源有利于抗體工藝的優化。因 此，隨著抗體行業的不斷優化，對酸堿變異體的定性分析需求 日益增長。常規的離子交換法和iCIEF法都用UV作為檢測器。但 UV檢測器僅依靠保留時間定性，無法對沒有對照品的組分進行 歸屬。由于常規離子交換法和iCIEF方法使用難揮發性的鹽作為 流動相或者添加劑，造成這兩種方法難以與MS兼容。如離子交 換法用氯化鈉和磷酸鹽作為流動相添加劑，iCIEF方法使用甲基 纖維素和尿素作為添加劑。發展MS兼容的電荷異構體分離方法 對抗體行業的生產技術優化和抗體質量研究有著重要的意義，因此，近年來各研究結構和研究人員開始關注該領域。 2018年，ThermoFisher的研究人員Ken Cook等發表了一種以 pH梯度為基礎的SCX-MS方法，用于單抗的電荷異構體分析[8] 。為了方便中國讀者研究和使用該方法，本文將這個方法的一 些細節進行分享，并將這個方法用于9種單抗 的電荷異構體分析，為抗體企業用戶提供參考。

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